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来源:最佳娱乐365bet娱乐场下载日期:2019-09-09 08:02 浏览:
我一直在做WB很长一段时间,最大的困难就是样品准备!
蛋白质降解有时是无法想象的,它可能会出乎意料地糟糕或者可能完全没问题。如果你只使用WB,我认为“快速完全分裂,第一次致密化和保存”的原则更有效。
取出缓冲液,然后量化蛋白质并将其余部分加入电荷中
缓冲液完全变性,然后单独存放。
有时它比蛋白酶抑制剂更有效。
另一种感觉是样品中感兴趣的蛋白质的量限于WB的检测下限。通用蛋白质的量优选为1ng或更多(尽管ECL方法的下限为0)。
1ng,即100pg,优选10ng或更多。
为此,有必要在执行WB之前完全考虑靶蛋白可能存在。建议在完成准备工作后设计细胞或组织的数量。不要稀释样品。否则就会很困难。